高效液相色谱以其灵敏、高效快捷、液相可分离大多数液体样品等优点，色谱沙参广泛应用于中药有效成分含量测定、法测组分分析、定北指纹图谱等方面。中的蔗糖指纹紫外检测器（UV）具有高灵敏度和稳定性，图谱因此高效液相色谱中应用较为广泛，高效但是液相对于没有紫外吸收或紫外末端吸收的有机化合物，其无法检测。色谱沙参蒸发光散射检测器（ELSD）弥补了上述紫外检测器的法测不足，显示出极大的定北优越性。2020年版《中国药典》已经在黄芪、中的蔗糖指纹四季青、图谱酸枣仁、高效山银花等20种中药材的含量测定项目中使用蒸发光散射检测器。

北沙参是伞形科植物珊瑚菜（GlehnialittoralisFr.SchmidtexMiq.）的干燥根，为常用中药，可缓解口燥咽干、肺热咳嗽等病症，其主要化学成分为糖类、香豆素类、磷脂、生物碱、氨基酸、挥发油、微量元素等。有研究表明，北沙参中的糖类成分含量最高，具有较好的抗肿瘤、抗氧化以及免疫调节活性。因此对北沙参中糖类成分进行测定，可以有效评价北沙参的质量，保证临床用药有效性。中药指纹图谱是一种综合的、可量化的鉴定手段，可从整体上鉴别评价中药材及中药制剂半成品质量的真实性、优良性、稳定性。成分测定与指纹图谱联合使用，可以全面评价中药的质量。

目前法定标准中没有北沙参的含量测定和指纹图谱检测项目，为了增强标准的可控性，笔者建立了北沙参的指纹图谱测定方法和蔗糖的含量测定方法，以期为制订北沙参质量标准奠定基础。

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

高效液相色谱仪：Waters2695型，附带Waters2420型蒸发光散射检测器和Empower色谱工作站，美国waters公司。精密电子天平：AGBP210S型，感量为0.00001mg，德国Sartorius公司。乙腈：色谱纯，美国赛默飞世尔公司。实验所用其余试剂均为分析纯。实验用水为超纯水。蔗糖对照品：50mg，编号为1507–200001，中国药品生物制品检定研究院。

北沙参药材编号和来源见表1。

1.2 对照品溶液的制备

取蔗糖对照品10mg，精密称定，加水定容至10mL的量瓶中，配制成1mg/mL的蔗糖对照品溶液，摇匀，用0.45µm微孔滤膜滤过，即得。

1.3 样品溶液的制备

取北沙参样品粉末（过0.42mm筛）4g，精密称定，加40%乙醇240mL，超声提取（功率250W，频率53kHz）30min，滤过，取续滤液100mL，浓缩至10mL，0.45µm微孔滤膜滤过，即得。

1.4 色谱条件

谱柱：InnovalNH₂色谱柱（250mm×4.6mm，5µm，北京艾杰尔科技有限公司）；流动相：乙腈-水（80∶20），等度洗脱；流量：1mL/min；柱温：30℃；ELSD的漂移管温度：60℃；喷雾器加热级别：100%；气体压力：137.90kPa。

2 结果与讨论

2.1 蒸发光散射检测器系统条件的优选

2.1.1 正交试验因素、水平设计

蒸发光散射检测器的系统条件由喷雾器加热级别、漂移管温度、气体压力和增益4个条件组成，由于增益值仅影响信号放大的程度，对检测结果没有影响，所以本试验以漂移管温度A、喷雾器加热级别B、气体压力C为3个考察因素，每个因素分别设有三个水平，通过正交试验对检测器条件进行优选，因素水平见表2。

2.1.2 正交试验方法与结果

精密吸取对照品溶液10µL，注入高效液相色谱仪进行检测。以蔗糖的峰面积作为评价指标，优选条件。结果见表3～表5。

由表5可知，A、C两个因素P值均小于0.05，说明漂移管温度、气体压力这两个因素对蔗糖的测定均具有显著性意义；B因素的P值大于0.05，说明喷雾器加热级别对蔗糖的测定不具有显著性意义。根据试验结果进行直观分析，A1B3C1为最佳选择，即漂移管温度为60℃，喷雾器加热级别为100%，气体压力为137.90kPa。

2.2 色谱条件选择与色谱图

氨基柱其固定相是以超纯全多孔球形硅胶为基质，通过采用独有的固定相键合技术，使用含有氨基丙基官能团的有机硅烷键合而成，能比硅胶柱更快达到平衡，对流动相的水含量没有硅胶柱敏感。氨基柱可用于极性化合物的正相分析，弱阴离子交换以及含水的反相液相分析。氨基柱柱被广泛应用于木糖、乳糖、葡萄糖等糖类的反相分析模式中。故本实验选用氨基柱作为色谱柱。

实验选用氨基柱作为色谱柱。分别吸取蔗糖对照品溶液和样品溶液各10µL，注入高效液相色谱仪检测，开启ELSD采集信号，得到蔗糖对照品和样品的蒸发光检测色谱图，见图1、图2。由图1、图2可知，对照品图谱和样品图谱中，ELSD检测到蔗糖峰在11.5min附近。

2.3 线性关系与检出限

取蔗糖对照品溶液，分别进样2.5、5、10、15、20、25µL，经ELSD检测，以蔗糖进样质量的自然对数值为横坐标X，以蔗糖峰面积的自然对数值为纵坐标Y，进行线性回归计算得线性回归方程为Y=1.1180X+11.86（r=0.9997），结果表明，蔗糖进样质量在7.30～72.95µg范围内线性关系良好。将蔗糖对照品溶液逐级稀释，分别进样分析，以3倍信噪比计算检出限，计算得检出限为0.02mg/mL。

相关链接：乙腈，蔗糖，木糖，氨基酸

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